PCR實驗室規劃設計與建設指南

　　PCR實驗室規劃設計

　　標準PCR實驗室分為四個區域：

　　N1.試劑配製區;

　　N2.樣品處理區;

　　N3.核酸擴增區;

　　N4.產品分析區;

　　如果使用全自動分析儀，該區域可適當合並。

　　(進入每個工作區域必須嚴格按照一個方向進行，不同的工作區域使用不同的工作服，如不同的顏色。工作人員離開工作區時，不得帶出工作服)

　　PCR實驗室平麵布局

　　各區功能分別為

　　試劑準備區：擴增試劑的製備、分裝、保存。

　　樣品處理區：樣品登記、分裝、核酸提取、保存和加樣。

　　擴增產品分析區：擴增產品的測定、結果分析、登記及報告。

　　擴增前區與擴增後區應嚴格分開，必須使用不同的房間，兩區之間最好有一定的間隔。

　　少量試劑可在樣品處理區配製。

　　樣品處理區和試劑準備區在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下，可設置在同一房間：

　　在生物安全櫃內操作;

　　每個實驗人員。實驗組分別使用自己的試劑和耗材;

　　儲存汙染物的器皿應密封並一次性使用;

　　實驗前後對操作區域和共享設備進行清潔消毒。

　　PCR實驗室建設規劃要點。

　　1.主體結構：

　　主體為彩鋼板。鋁合金型材。室內所有陰角和陽角均采用鋁合金50內圓角鋁，解決易汙染、積塵、不易清洗等問題。結構牢固，線條簡潔，美觀大方，密封性好。

　　2.標準三區分隔及氣壓調節：

　　PCR過程分為三個獨立的試驗區：試劑準備、標本製備和PCR擴增試驗。整個區域有一個整體的緩衝走廊。每個獨立的試驗區都有一個緩衝區。同時，通過氣壓調節，試劑和標本在整個PCR試驗過程中免受氣溶膠汙染，減少擴增產品對人員和環境的汙染。

　　緩衝區一、緩衝區二、PCR擴增區排氣扇可打開，試驗區外牆和門上安裝可調回風口，空氣通過回風口進入室內通風。

　　3.消毒：

　　紫外線燈安裝在三個實驗區、三個緩衝區的頂部和傳送窗內進行消毒。

　　移動紫外線燈也設置在試劑準備區和標本製備區，對試驗桌進行局部消毒。

　　4.機械連鎖不鏽鋼傳輸窗：

　　試劑和標本通過機械連鎖不鏽鋼(不建議使用電子連鎖)傳輸窗口傳輸，確保試劑和標本在傳輸過程中不受汙染(人物分流)

　　5.地麵。

　　地麵建議采用聚氯乙烯卷材地麵或自流平地麵，完整性好。易於清潔，耐腐蝕。無條件的，水磨石地麵或大瓷磚(至少800mm×800mm)接縫應小於2mm。

　　6.照明。

　　燈具應選用淨化燈具，可達到易清洗、無塵的特點。

　　在施工過程中要注意。

　　●標準化的安裝流程和全麵的服務流程。

　　●嚴格按照規範科學設計的安裝流程。

　　●安裝前需要確定以下安裝條件，如:電源電壓、電源進線位置、電話網線進線位置、進水水壓、安裝空間相對較小、地麵平整度、通風孔、進水管、下水管位置等。、理想狀態的空間尺寸和通風口尺寸。

　　設計要點

　　PCR實驗室可以是分散或組合的。完成一組PCR實驗通常需要四個實驗過程：試劑準備、樣品處理、核酸擴張和產品分析。如果需要實驗過程，還應增加樣品破碎過程。

　　一、分散PCR實驗室。

　　所謂分散PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗室相距較遠，布局分散。對於這種布局形式的PCR實驗室，由於不易相互幹擾，無需特殊條件。

　　二、組合PCR實驗室。

　　所謂組合形式PCR實驗室，是指完成PCR四個實驗過程的實驗室相鄰布局，形成獨立實驗區的形式。對於組合形式的PCR實驗室，由於各實驗室的集中布局，容易相互幹擾，因此對整體布局和屏障係統有一定的要求。每個房間都在入口處設置一個緩衝室，以減少室內外空氣交換。

　　一些經驗：

　　試劑製備室和樣品處理室應為微正壓，防止外界含有核酸氣溶膠的空氣進入，造成汙染;

　　通過控製進風量大於排風量，可達到正壓效果。

　　核酸擴增室和產品分析室應為微負壓，防止含有核酸的氣溶膠擴散汙染試劑和樣品，通過控製排氣量大於進氣量達到負壓效果。

　　理想情況下，PCR實驗室緩衝室可設置正壓，使室內空氣不流向室外，室外空氣不流向室內。PCR實驗室進氣由原中央空調控製，要求中央空調出風口安裝在指定點，地麵鋪設後高度為2600mm。

　　如果使用熒光PCR儀，擴增室和產品分析室可以合並。

　　如果房間深度允許，可以設置PCR內部專用走廊。需要指出的是，在減少室內外空氣交換方麵，緩衝房比專用走廊更有意義。

　　各區域之間應有單向實驗流程、物流、人流和氣流，形成單向工藝的保護屏障，避免實驗之間的相互幹擾，防止核酸氣溶膠對實驗過程造成汙染，產生假結果。

　　實驗室牆體，包括天花板，應結構牢固，氣密性好;所有陰角應采用弧形線條過渡;牆體內壁幹淨，無吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地麵材料應滿足無縫、無滲漏、幹淨、耐腐蝕的要求。

　　PCR實驗室主要設備

　　試劑準備區。

　　儀器設備主要包括冰箱、超淨平台、加樣器、混勻器、平衡和離心機、加樣器、平衡除特殊外，還應定期校準。試劑分裝應在超淨平台上進行擴增反應。混合物應與分子生物學進行比較。試劑準備好後，應進行質量檢查：一是是否有汙染。二是檢測試劑的擴增效果。

　　標本製備區。

　　儀器設備主要包括生物安全櫃、加樣器、離心機、溫育器、混勻器等。

　　擴增區

　　擴增區的主要儀器是核酸擴增器、超淨台、微量取樣器、離心機和移動紫外線燈。擴增器需要校準。並配備UPS電源，防止電壓波動對擴增效果的影響。

　　分析區

　　本區域使用的儀器設備包括酶標記儀、洗板機、取樣器、水浴箱等潔淨實驗區的緩衝區，部分麵積不得超過主實驗室的八分之一，有規定。

　　PCR實驗室不容忽視的瑣碎設計

　　1.實驗室空調通風係統設計及壓力控製。

　　PCR實驗室沒有嚴格的淨化要求，但為了避免各實驗區之間交叉汙染的可能性，應采用全排氣的氣流組織形式。同時，嚴格控製輸送和排氣，確保各實驗區的壓力要求。

　　2.汙染防治。

　　PCR實驗室設計的核心問題是如何避免汙染。在實際工作中，常見的汙染類型有以下幾種物的汙染;天然基因組DNA的汙染;試劑的汙染和標本之間的汙染。一旦發生汙染，實驗必須停止，直到找到汙染源，實驗結果必須無效，需要重新實驗。因此，圍繞實驗室尋找汙染源既耗時又繁瑣，浪費人力物力。因此，要避免汙染，首先要預防，而不是排除。

　　嚴格管理PCR實驗室不可或缺。

　　(1)嚴格控製進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室。如果條件允許，應設置獨立通道和進出整個實驗區的門;

　　(2)盡量減少實驗區不必要的行走，以減少交叉汙染的可能性。

　　(3)擴增產品分析區是擴增產品汙染的主要來源。廢液不能倒入實驗室。消毒劑浸泡消毒後，必須遠離實驗室。吸頭等一次性材料也應用消毒劑浸泡消毒，如焚燒;

　　(4)擴展產品分析區可能使用一些可能引起基因突變和有毒物質的物質，應特別注意實驗人員的安全保護。3.5實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件，應根據不同實驗室內容配備相應的設備和儀器，如超淨工作台、離心機、取樣器等。

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